Le 03.10.1866, le roi Guillaume de Prusse signa au château de Babelsberg près de Berlin un "brevet pour la prise de possession de l'ancien duché de Nassau", mettant ainsi fin au règne des ducs de Nassau à Wiesbaden.

Cette décision avait été précédée d'un conflit armé entre la Prusse et l'Autriche, qui avait été provoqué en premier lieu par des désaccords entre les deux États concernant l'administration commune du Schleswig-Holstein. La Prusse cherchait à annexer ce territoire et avait déjà conclu une alliance secrète avec l'Italie contre l'Autriche en avril 1866, en violation du traité sur lequel se basait la Confédération allemande. En fait, la lutte portait sur la suprématie de la Prusse en Allemagne, que Bismarck voulait en tout cas décider en faveur de la couronne prussienne, même par la guerre si nécessaire.

Trois semaines seulement après le début de la guerre, la Prusse remporta une victoire décisive à la bataille de Königgrätz le 3 juillet 1866, qui déboucha sur la paix préliminaire de Nikolsburg le 26 juillet 1866. Dans la paix finale de Prague, l'Autriche accepta le 23.08.1866 la dissolution de la Confédération germanique et l'incorporation par la Prusse de plusieurs États allemands de taille moyenne et petite, dont Nassau, qui avait combattu du côté autrichien.

Dès le 28 juillet 1866, les troupes prussiennes avaient pénétré dans le nord du Nassau et avaient occupé temporairement Montabaur, Dillenburg, Herborn et Ems. Après la bataille de Königgrätz, Bismarck ordonna à l'armée prussienne du Main d'occuper l'ensemble du duché. Le duc Adolphe de Nassau quitta Wiesbaden le 15 juillet. Les négociations d'indemnisation avec la Prusse s'étendirent sur plus d'un an. Dans le contrat d'indemnisation du 18.09.1867, on lui garantit la propriété des châteaux de Biebrich et de Weilburg, du pavillon de chasse de Platte près de Wiesbaden, du petit château de Pauline ainsi que de quelques propriétés forestières. De plus, il reçut une compensation financière de plus de 15 millions de fl. Wiesbaden fut occupée par les troupes prussiennes le 18 juillet 1866.

L'annexion de Nassau ne rencontra guère d'opposition de la part de la population. Le 29 juillet, l'ancien Landrat de Wetzlar, Gustav von Diest, prit en charge l'administration de Nassau en tant que commissaire civil et parvint à promouvoir la monarchie prussienne par des mesures de confiance. Lors de la proclamation solennelle de la reprise, le 09.10.1866, les drapeaux prussiens et de Nassau purent flotter côte à côte en toute harmonie sur la Schillerplatz.