Domnia ducilor de Nassau la Wiesbaden a luat sfârșit la 3 octombrie 1866, prin semnarea de către regele Wilhelm al Prusiei, la Palatul Babelsberg de lângă Berlin, a unei "patente de luare în posesie a fostului Ducat de Nassau".

Aceasta a fost precedată de un conflict militar între Prusia și Austria, care a apărut aparent din cauza neînțelegerilor dintre cele două state cu privire la administrarea comună a Schleswig-Holstein. Prusia dorea să anexeze acest teritoriu și încheiase deja o alianță ofensivă secretă cu Italia împotriva Austriei în aprilie 1866, încălcând astfel tratatul pe care se baza Confederația Germană. Adevărata bătălie era pentru supremația prusacă în Germania, pe care Bismarck dorea să o decidă în favoarea coroanei prusace cu orice preț - prin război, dacă era necesar.

La doar trei săptămâni de la începerea războiului, prusacii au obținut o victorie decisivă în Bătălia de la Königgrätz din 3 iulie 1866, care a culminat cu Pacea preliminară de la Nikolsburg din 26 iulie 1866. În Pacea finală de la Praga din 23 august 1866, Austria a fost de acord cu dizolvarea Confederației Germane și încorporarea de către Prusia a mai multor state germane mici și mijlocii, inclusiv Nassau, care luptase de partea Austriei.

Trupele prusace invadaseră deja nordul Nassau la 28 iulie 1866 și ocupaseră temporar Montabaur, Dillenburg, Herborn și Ems. După bătălia de la Königgrätz, Bismarck a ordonat Armatei principale prusace să ocupe întregul ducat. Ducele Adolph zu Nassau a părăsit Wiesbaden pe 15 iulie. Negocierile de compensare cu Prusia s-au prelungit mai mult de un an. În acordul de compensare din 18 septembrie 1867, i s-a garantat dreptul de proprietate asupra palatelor din Biebrich și Weilburg, a cabanei de vânătoare Platte de lângă Wiesbaden, a Paulinenschlösschen și a unor proprietăți forestiere. În plus, a primit o compensație financiară de peste 15 milioane fl. Wiesbaden a fost ocupat de trupele prusace la 18 iulie 1866.

Anexarea orașului Nassau a întâmpinat puțină opoziție din partea populației. La 29 iulie, fostul administrator districtual din Wetzlar, Gustav von Diest, a preluat administrația Nassau în calitate de comisar civil și a reușit să promoveze monarhia prusacă prin măsuri de încredere. La ceremonia de proclamare a preluării, la 9 octombrie 1866, steagurile Prusiei și Nassau au fluturat unul lângă celălalt în Schillerplatz.