El gobierno de los duques de Nassau en Wiesbaden llegó a su fin con una "patente de toma de posesión del antiguo ducado de Nassau" firmada por el rey Guillermo de Prusia en el palacio de Babelsberg, cerca de Berlín, el 3 de octubre de 1866.

El precedente fue un conflicto militar entre Prusia y Austria, originado aparentemente por desacuerdos entre ambos Estados sobre la administración conjunta de Schleswig-Holstein. Prusia pretendía anexionarse este territorio y ya había concluido una alianza ofensiva secreta con Italia contra Austria en abril de 1866, incumpliendo el tratado en el que se basaba la Confederación Germánica. La verdadera batalla era por la supremacía prusiana en Alemania, que Bismarck quería decidir a favor de la corona prusiana a toda costa, con la guerra si era necesario.

Apenas tres semanas después del inicio de la guerra, los prusianos lograron una victoria decisiva en la batalla de Königgrätz el 3 de julio de 1866, que culminó en la Paz Preliminar de Nikolsburg el 26 de julio de 1866. En la Paz definitiva de Praga, el 23 de agosto de 1866, Austria aceptó la disolución de la Confederación Germánica y la incorporación a Prusia de varios estados alemanes pequeños y medianos, entre ellos Nassau, que había luchado en el bando austriaco.

Las tropas prusianas ya habían invadido el norte de Nassau el 28 de julio de 1866 y ocupado temporalmente Montabaur, Dillenburg, Herborn y Ems. Tras la batalla de Königgrätz, Bismarck ordenó al Ejército Principal prusiano ocupar todo el ducado. El duque Adolfo de Nassau abandonó Wiesbaden el 15 de julio. Las negociaciones de compensación con Prusia se prolongaron durante más de un año. En el acuerdo de compensación del 18 de septiembre de 1867, se le garantizó la propiedad de los palacios de Biebrich y Weilburg, el pabellón de caza de Platte cerca de Wiesbaden, las Paulinenschlösschen y algunas propiedades forestales. Además, recibió una compensación económica de más de 15 millones de florines. Wiesbaden fue ocupada por las tropas prusianas el 18 de julio de 1866.

La anexión de Nassau encontró poca oposición por parte de la población. El 29 de julio, el antiguo administrador del distrito de Wetzlar, Gustav von Diest, se hizo cargo de la administración de Nassau como comisario civil y pudo promover la monarquía prusiana con medidas de confianza. En la ceremonia de proclamación de la toma de posesión, el 9 de octubre de 1866, las banderas de Prusia y Nassau ondearon una junto a la otra en la Schillerplatz.