Rządy książąt Nassau w Wiesbaden dobiegły końca wraz z "patentem na objęcie w posiadanie byłego Księstwa Nassau" podpisanym przez króla Wilhelma Pruskiego w Pałacu Babelsberg pod Berlinem w dniu 3 października 1866 roku.

Zostało to poprzedzone konfliktem zbrojnym między Prusami a Austrią, który rzekomo powstał z powodu nieporozumień między tymi dwoma państwami w sprawie wspólnego zarządzania Szlezwikiem-Holsztynem. Prusy dążyły do aneksji tego terytorium i już w kwietniu 1866 r. zawarły tajny sojusz ofensywny z Włochami przeciwko Austrii, naruszając traktat, na którym opierała się Konfederacja Niemiecka. Prawdziwa bitwa toczyła się o pruską supremację w Niemczech, którą Bismarck chciał rozstrzygnąć na korzyść korony pruskiej za wszelką cenę - w razie konieczności w drodze wojny.

Zaledwie trzy tygodnie po rozpoczęciu wojny, Prusacy odnieśli decydujące zwycięstwo w bitwie pod Königgrätz 3 lipca 1866 roku, które zakończyło się wstępnym pokojem w Nikolsburgu 26 lipca 1866 roku. W ostatecznym pokoju praskim z 23 sierpnia 1866 r. Austria zgodziła się na rozwiązanie Konfederacji Niemieckiej i przyłączenie do Prus kilku małych i średnich państw niemieckich, w tym Nassau, które walczyło po stronie austriackiej.

Wojska pruskie najechały północną część Nassau już 28 lipca 1866 r. i tymczasowo zajęły Montabaur, Dillenburg, Herborn i Ems. Po bitwie pod Königgrätz, Bismarck rozkazał pruskiej Armii Głównej zająć całe księstwo. Książę Adolf zu Nassau opuścił Wiesbaden 15 lipca. Negocjacje odszkodowawcze z Prusami ciągnęły się przez ponad rok. W umowie odszkodowawczej z 18 września 1867 r. zagwarantowano mu własność pałaców w Biebrich i Weilburgu, pałacu myśliwskiego Platte w pobliżu Wiesbaden, Paulinenschlösschen i niektórych posiadłości leśnych. Ponadto otrzymał rekompensatę finansową w wysokości ponad 15 milionów fl. Wiesbaden zostało zajęte przez wojska pruskie 18 lipca 1866 roku.

Aneksja Nassau spotkała się z niewielkim sprzeciwem ludności. W dniu 29 lipca były starosta Wetzlar, Gustav von Diest, przejął administrację Nassau jako komisarz cywilny i był w stanie promować pruską monarchię za pomocą środków budujących zaufanie. Podczas uroczystej proklamacji przejęcia władzy 9 października 1866 r. na Schillerplatz powiewały obok siebie flagi Prus i Nassau.